背景介绍
什么是肝素
肝素（Heparin）因首先从肝脏发现而得名，天然存在于肥大细胞，现在主要从牛肺或猪小肠提取。肝素是一种黏多糖硫酸脂，由葡萄糖胺、L-艾杜糖醛苷、N-乙酰葡萄糖胺和D-葡萄糖醛酸交替组成。
临床应用及研究显示，肝素除具有抗凝作用外，还具有多种生物活性和临床用途。肝素与多种生物分子都具有亲和作用，基于这一特性，博格隆将其共价偶联到高交联度琼脂糖上，制成一种族特异性亲和层析介质——Heparin Bestarose FF。
Heparin Bestarose FF具有物理及化学稳定、配基不易脱落、使用寿命长、应用范围广泛、容易放大等特点。
肝素亲和填料的主要特性
• 高载量：≥2.0mg bovine AT III/mL填装介质。
• 高选择性：特异性亲和配基，高效纯化目标蛋白。
• 高稳定性：耐受常用溶剂，如8M尿素、6M盐酸胍、0.1M NaOH、4M NaCl等进行清洁。
肝素亲和填料的应用领域
药品
与一般亲和介质的不同之处在于，肝素与近百种蛋白都具有亲和作用，因此Heparin Bestarose FF可广泛应用于各种生物分子特别是各种酶类的分离纯化，包括抗凝血酶III、类凝血酶、人凝血因子IX、XI、VIII、脂蛋白脂肪酶、胶原酶、DNA聚合酶等；也能和人白介素、人前列腺生长因子、重组人血管内皮生长因子、软骨生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、重组人酸性成纤维细胞生长因子、重组肝细胞生长因子、重组鼠肝素辅因子II、重组人血小板第四因子、重组人内皮抑素、重组人角质细胞生长因子等生物大分子结合。
食品
肝素亲和填料除了以上在制药领域中应用以外，在食品领域也有应用。国家标准GB5009.299—2024《食品安全国家标准 食品中乳铁蛋白的测定》于2024-02-08发布，并于2024-08-08实施。根据该国标，测定食品中乳铁蛋白的含量，需使用磷酸盐缓冲液提取试样，并且使用肝素亲和柱富集净化后，再进行测定。
Heparin Bestarose FF应用案例
Heparin Bestarose FF能从血浆蛋白中特异性地结合并分离抗凝血酶 Ⅲ，这种蛋白具有极强的抗凝血作用，可用于治疗血栓性疾病。
Heparin Bestarose FF从血浆中纯化抗凝血酶III
• 层析柱及介质：EzFast 1mL，Heparin Bestarose FF
• 样品：某动物血浆
• 结合缓冲液：0.1M Tris，0.15M NaCl，pH7.4
• 清洗缓冲液：0.1M Tris，0.33M NaCl，pH7.4
• 洗脱缓冲液：0.1M Tris，2.0M NaCl，pH7.4
Fig. 1 纯化后样品SDS-PAGE图
使用Tips
缓冲液
• 结合缓冲液：20~50mM PB或Tris，pH7.4~8.0，可以加入0.15M NaCl抑制非特异吸附。
• 洗脱缓冲液：20~50mM PB或Tris，1~2M NaCl，pH7.4~8.0。NaCl浓度需要根据目标蛋白的结合力进行适当调整。
流速
根据柱子的高度一般选用60~300cm/h的流速，柱高越大流速越慢。
清洗
定期的清洗能有效防止污染物的累积，保持层析介质稳定的工作状态。对于不同类型的杂质和污染物建议清洗条件如下：
• 离子键结合蛋白的去除：先用3~5个柱体积 2M NaCl清洗，后用3~5个柱体积纯水清洗。
• 沉淀或变性蛋白的去除：先用2个柱体积 0.1M NaOH清洗，后用5~10个柱体积纯水清洗，也可用6M盐酸胍或8M尿素清洗。
• 疏水性结合的蛋白的去除：先用0.1%~0.5%的非离子去污剂清洗，后用3~5个柱体积纯水清洗。
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