DNA Pol θ

爱思益普专注于基于靶点的先导化合物筛选和优化，批量构建了新药筛选的靶点和筛选技术，致力于以高效、专业的服务，帮助新药研发企业快速有效地推进新药研发项目。在POLθ项目中我们构建了三种不同的生化方法分别用于POL θ-N ATPase抑制剂的筛选和POL θ-C polymerase抑制剂筛选，同时爱思益普可提供相关蛋白产品。

1.POL θ-N ATPase抑制剂筛选_ADP-Glo assay

2.POL θ-C polymerase抑制剂筛选_ PicoGreen方法

在此方法中，我们合成了Template和Primer，以dNTP为原料，利用POL θ-C polymerase活性合成dsDNA，用PicoGreen试剂测定化合物对POL θ-C活性的抑制能力。

3.POL θ-C polymerase抑制剂筛选_TR-FRET 方法

PicoGreen可以测定化合物对POL θ-C抑制率，但是该方法是利用PicoGreen试剂来检测dsDNA的合成，一方面Template和Primer本身就可形成dsDNA双链，本底高，窗口小，耗时长，对于操作要求高。其次PicoGreen试剂读取的是荧光强度，会受到反应体系来源荧光的干扰；最后，PicoGreen方法在dNTP类似物的抑制剂筛选过程中并不能区分具体的(dATP , dCTP, dGTP, dTTP) 类似物类型。

POL θ-C polymerase抑制剂

ArtiosPharma 于2021年6月份在Nature Communications上发表了POL θ-C polymerase抑制剂ART558,这是一种对Pol θ聚合酶具有高活性，高选择性的小分子变构抑制剂。实验结果显示ART558是dNTP以及dsDNA的非竞争性抑制剂，并以剂量依赖性方式抑制Pol θ聚合酶活性，其IC50 为7.9 nM。此外，ART558也显示了高度选择性，不抑制人类其他DNA聚合酶，如Polα、Polγ、Polη 和 Polν等。但随后的实验也显示了ART558具有较差的代谢稳定性及生物利用度。

同年9月Artios Pharma将另一款POL θ-C polymerase抑制剂ART4215推向了临床期，这是全球首个也是唯一一个进入临床的具有高选择性、可口服的小分子Pol θ聚合酶抑制剂。目前关于ART4215的公开信息较少，其临床效果还有待于验证。

Pol θ抑制剂

POL θ是近年来发现的一种新的治疗HR缺陷性肿瘤的药物靶点。POL θ在伴有HR缺陷的乳腺和卵巢肿瘤的亚型中的表达特别高，它介导DNA双链断裂(DBS)的修复，弥补HR的损失。因此，POL θ具有合成致死性，抑制POL θ活性对HR缺陷性肿瘤细胞具有杀伤作用，诱导细胞死亡。此外，POL θ抑制剂与PARP抑制剂对HR缺乏性肿瘤的杀伤具有协同作用，目前尚不清楚POL θ的哪些功能与HR的综合致死性有关，然而POL θ具有独特的可成药性，为开发POL θ抑制剂提供了强有力的理论基础。

爱思益普致力于难成药靶点筛选，药物筛选服务，药代动力学检测、离子通道检测、蛋白制备服务等.

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